Nutriments | Texte complet | L'expression des leucocytes à la suite d'un infarctus du myocarde chez le rat est modulée par une consommation modérée de vin blanc

1. Introduction

Une interruption soudaine de la circulation sanguine artérielle, entraînant une privation d'oxygène, conduit à la nécrose du tissu myocardique non perfusé, une affection connue sous le nom d'infarctus du myocarde (IM). Le contenu intracellulaire libéré des cellules en train de mourir déclenche presque instantanément une réponse inflammatoire intense basée sur l'activation de nombreux mécanismes immunitaires innés, parmi lesquels l'induction de la chimiokine semble être prédominante. Il semble que le profil d'expression des chimiokines dans l'infarctus du myocarde forme la composition de l'infiltrat de leucocytes, les neutrophiles apparaissant / s'accumulant régulièrement en premier, suivis de près par les monocytes et les lymphocytes pro-inflammatoires (1). L'une des nombreuses approches visant à réduire la taille de l'infarctus est centrée sur la prévention des modifications morphologiques nécessaires aux neutrophiles pour initier des interactions intercellulaires et une infiltration tissulaire ultérieure (2). Pendant plus d’un quart de siècle, les neutrophiles ont été considérés comme la principale source d’enzymes protéolytiques qui contribuent non seulement au nettoyage des plaies des cellules mortes, mais également aux cardiomyocytes vitaux en augmentant le risque d’effets indésirables lors du remodelage cardiaque (3). ). Des études récentes suggèrent non seulement que les neutrophiles jouent un rôle important dans le recrutement des cellules mononucléées et dans la différenciation / polarisation des macrophages vers un phénotype réparateur (4), mais montrent également des preuves convaincantes de l’existence de protéines pro (N1) et anti-inflammatoires. Sous-populations de neutrophiles (N2) (5). Il semble que la modulation de la densité des neutrophiles, de leur niveau d'activité et de leur durée de vie au début des heures post-infarctus affecte de manière critique la phase inflammatoire aiguë et les autres phases (subaiguës) de la récupération (6). Cette opinion est corroborée par le fait que l'enzyme myéloperoxydase (MPO), principalement libérée par les neutrophiles activés et considérée comme faisant partie de la défense immunitaire innée, est également associée au niveau de dépôt de collagène et à la susceptibilité à la fibrillation auriculaire. et ventriculaire, ce qui peut avoir des effets néfastes dans la phase post-aiguë de la guérison d'une crise cardiaque (7).
Les monocytes et les macrophages, tels que les neutrophiles, s'infiltrent presque immédiatement après le MI dans les zones myocardiques ischémiques. Une revue récente de la morphologie des macrophages cardiaques a mis en évidence leur rôle dans toutes les phases de la guérison de l'IM, la libération d'une série de composés pro-inflammatoires et le nettoyage des plaies par phagocytose afin de produire des facteurs pro-angiogéniques et de construction de cicatrices (8). De la même manière que les neutrophiles, les macrophages dans les régions infarcies peuvent être divisés en populations pro-inflammatoires M1 et M2 répressives, la sous-population M1 étant dominante dans la phase initiale (les trois premiers jours). Cependant, leur présence prolongée peut allonger la durée de la phase inflammatoire et influer négativement sur la formation de cicatrices (8). La CD68 / macrosialine, une glycoprotéine hautement glycosylée, est un marqueur connu hautement exprimé sur les phagocytes mononucléés, y compris les macrophages, et est généralement utilisée pour la détection des processus inflammatoires (9).

Compte tenu de ce qui précède, il apparaît que les caractéristiques quantitatives et qualitatives des composants cellulaires impliqués dans le processus inflammatoire post-MI doivent être soigneusement "adaptées" afin de minimiser la possibilité d'événements indésirables et de permettre une transition optimale vers des étapes ultérieures de la guérison. , crise cardiaque.

Considérant que la maladie coronarienne est considérée principalement comme une "maladie liée au mode de vie" et que les stratégies pharmacologiques centrées sur la modulation inflammatoire post-conditionnelle semblent relativement inefficaces, il conviendrait peut-être de concentrer l'attention sur des interventions diététiques de grande envergure, largement envisagées. disponible pour une utilisation dans la vie quotidienne. Les capacités cardioprotectrices et les avantages d'une consommation modérée de vin ont déjà été proposés dans de nombreuses études épidémiologiques récentes, mais portent généralement sur le potentiel de protection et de réduction des risques (10).
Récemment, les travaux publiés par notre laboratoire, dans lesquels nous avons examiné l'expression de marqueurs inflammatoires précoces bien définis, ont apporté de nouvelles connaissances sur le potentiel anti-inflammatoire de la consommation modérée de vin blanc (11). L’objectif principal de cette étude était de réaliser une évaluation qualitative et quantitative des infiltrats de cellules inflammatoires 24 heures après la ligature coronaire permanente afin de déterminer si la consommation de vin blanc standard (à faible teneur en phénol) et modérée était modérée. (contenu phénolique élevé) module l'infiltration inflammatoire. Les outils pour l'évaluation histologique de l'infiltrat inflammatoire étaient deux marqueurs inflammatoires bien définis pouvant être associés à des sous-populations particulières de cellules: la myéloperoxydase (MPO), pour l'identification de granulocytes polymorphonucléaires et le groupe de différenciation 68 (CD68). , pour la détection des agranulocytes mononucléés.

2. Méthodes

2.1. Considérations éthiques

Toutes les procédures et tous les protocoles expérimentaux étaient conformes aux directives "Recherche sur les animaux: Rapports sur les expériences in vivo" (ARRIVE) et étaient conformes à la directive de l'Union européenne 2010/63 / UE sur les expériences sur animaux. Ils ont également été approuvés par le Comité d'éthique de la Faculté de médecine de l'Université de Split et par le Comité d'éthique du Ministère de l'agriculture de la République de Croatie (n ° 525-10 / 0255-16-7).

2.2. Modèle animal et design expérimental

On a utilisé 41 rats mâles Sprague-Dawley pesant 150 g (+/- 5 g) au début de l'expérience. Les animaux ont été obtenus à l’Animal House de l’Université de Split, où ils ont été logés dans un environnement à température contrôlée, dans un cercle clair-sombre de 12 à 12 heures.

Les rats ont été détenus individuellement dans des cages spéciales avec des lits de sciure de bois et de la viande de rat standard (4RF21 GLP; Mucedola srl, Settimo Milanese, Italie), disponible à volonté.

Avant le début de la procédure expérimentale, la pesée des animaux a été randomisée en 6 groupes expérimentaux principaux. Seuls les eaux potables d'animaux (WO), les vins blancs standard (WW) et les vins blancs riches en polyphénols (PW) après la période de consommation ont subi un infarctus du myocarde expérimental; par conséquent, nous les avons appelés le "groupe MI" d'animaux. Le nombre d'animaux utilisés dans ce groupe est présenté dans le tableau 1. Le "groupe non MI" était constitué de 6 simulies aquatiques (SWO), de 4 simulacres viticoles (SWW) et de 5 animaux témoins non liés à la consommation d'eau. à pas de chirurgie (CONT). Les animaux qui buvaient du vin se voyaient offrir un vin blanc standard ou un vin blanc riche en polyphénols ad libitum, 24 heures par jour pendant 4 semaines, avec inclusion quotidienne d'eau du robinet pendant 6 heures. Les animaux CONT et WO se sont vus offrir de l'eau du robinet sans restriction.
Le vin blanc standard utilisé était Graševina 2015, Krauthaker Winery, Croatie, contenant 13,0% d'alcool. Le vin blanc riche en polyphénols a été obtenu à partir de la même vigne dans le même vignoble et lors de la même récolte, selon les principes traditionnels de la "production de vin géorgien"; le jus de raisin a subi une fermentation spontanée au contact des parties dures du raisin. Une fois la fermentation terminée, les graines et les pellicules des raisins ont été stockées dans des cuves de fermentation qui ont été scellées et maintenues à une température constante pendant quatre mois (12). Le résultat de ce processus a été la production d'un vin blanc avec une teinte orange ou ambrée qui était, du point de vue de la teneur en composés phénoliques, très similaire aux vins rouges classiques (13).

La quantité de nourriture consommée et l'augmentation de poids corporel de chaque animal ont été enregistrées chaque semaine, tandis que la consommation de liquide était enregistrée quotidiennement.

Nos calculs, qui font l’objet d’une étude distincte, montrent que la consommation quotidienne totale d’alcool (environ 1 g par kilo / jour) et sa contribution à l’apport calorique quotidien sont bien inférieures à interne du modèle de consommation modérée lorsqu’il est traduit en scénarios humains (13).

Après 28 jours, une ligature chirurgicale de l'artère coronaire antérieure descendante a été réalisée, induisant un infarctus du myocarde. A ce stade, les animaux pesaient entre 300 et 350 g.

2.3. Opération chirurgicale

Avant l'intervention, les rats ont été anesthésiés avec un mélange de kétaminol (Ketaminol 10, 1,2 ml / kg; Intervet International, Pays-Bas) et de xylazino (Xylapan, 0,4 ml / kg; Vetoquintol, Suisse ), injecté par voie intramusculaire dans la région du tendon du genou droit. Après l'anesthésie, une intubation endotrachéale avec ventilation a été réalisée afin de permettre la procédure chirurgicale par voie transabdominale, comme décrit précédemment (14). Au cours de cette phase de l'expérience, deux critères d'inclusion principaux ont été suivis: pâleur immédiate de la surface ventriculaire gauche en signe de réussite de la ligature coronaire et comparaison de l'ECG avant et après ligature sur la base de trois critères principaux d'ischémie aiguë, qui sont l’élévation du segment ST ou la dépression, l’inversion de la vague T ou le bloc de branche gauche qui vient d’être établi.

Trois animaux sont morts peu de temps après la chirurgie, d'une insuffisance cardiaque, probablement à la suite d'une grave crise cardiaque, tandis que 4 autres animaux ne remplissaient pas les critères visuels et peropératoires de l'ECG. Ils ont donc été exclus des examens ultérieurs.

Chez les faux animaux, une aiguille chirurgicale a été passée sous l'artère coronaire antérieure antérieure gauche (LAD), mais la ligature n'a pas été entreprise. Cela a été fait pour voir l'effet de l'approche opérationnelle plutôt que l'effet de l'ischémie sur l'expression de MPO et de CD68 dans le myocarde. Enfin, les animaux répondant aux critères d’inclusion ont dû récupérer jusqu’à ce qu’ils soient sacrifiés 24 heures exactement après l’infarctus. Les cœurs ont été extraits et placés dans le fixateur de Zamboni.

2.4. Traitement de tissu

Après 3 jours de fixation dans le fixateur Zamboni (4% de paraformaldéhyde et 0,2% d'acide picique dans du PBS 0,1 M à pH 7,4), les ventricules ont été coupés transversalement pour produire trois parties. La première coupe était à 4 mm sous le bord de l'auricule gauche et la suivante, à 4 mm sous la première. Le tissu a ensuite été noyé dans de la paraffine, sectionné en série (5 µm) et monté sur des lames. La zone d'infarctus a été établie sur des sections colorées avec H & E comme zone d'ischémie complète (absence d'infiltration de globules rouges), ce qui incluait également l'absence de cellules inflammatoires, tandis que la zone de péri-infarctus les cellules ont été "inondées" par des infiltrats inflammatoires et du sang rouge.

2.5. Coloration par immunofluorescence

Après le processus de déparafinisation, un protocole de récupération de l'antigène pour l'immunoflorescence a été utilisé en chauffant des coupes dans un tampon de sodium préchauffé (pH = 6,0) pendant 30 minutes (dans un appareil à vapeur). Par la suite, la liaison à une protéine non spécifique a été soumise à une molestation par une incubation de 30 minutes dans une solution de bloc de protéines (ab64226, Abcam, Cambridge, Royaume-Uni). Les anticorps primaires suivants ont été utilisés: anticorps polyclonal de lapin anti-myéloperoxydase (MPO) (ab9535, Abcam, Cambridge, Royaume-Uni, dilué à 1: 100) et anticorps monoclonal de souris anti-CD68 (ab31630, Abcam, Cambridge, Royaume-Uni, dilué à 1: 250). Après une nuit d'incubation à 4 ° C dans une chambre humidifiée et plusieurs lavages dans du PBS, les sections ont été incubées pendant 1,5 heure dans une combinaison d'anticorps secondaires spécifiques à l'espèce: Alexa Fluor 594 anti lapin de chèvre (ab150084) et souris anti-chèvre Alexa Fluor 488 (ab150117), tous deux produits par Abcam (Cambridge, Royaume-Uni) et dilués à 1: 200. Les échantillons ont ensuite été lavés dans du PBS et contre-colorés avec du 4-diamidino-2-phénylindole (DAPI) pour colorer les noyaux. Les contrôles de coloration comprenaient l'omission d'anticorps primaires ou secondaires lors de la procédure de coloration, ce qui entraînait l'absence de coloration. Après le dernier rinçage au PBS, les coupes ont été séchées à l’air et montées dans les supports de montage (Immuno-mount, Shandon, Pittsburgh, PA, États-Unis). Enfin, les sections ont été visionnées et photographiées à l'aide d'une caméra Canon PowerShot A480 (Canon, Japon) positionnée sur des paramètres de super macro et d'un microscope optique Olympus BX51 (Olympus, Japon) équipé d'une caméra Olympus DP71.

2.6. quantification

Cinq zones d’évaluation représentatives ont été établies en relation avec la zone infectée: trois zones de péri-infarctus (ZPI), une zone située au milieu de l’infarctus (ZI) et une zone située dans le segment postérieur du septum interventriculaire qui représente zone de contrôle non infarctus (CZ) de la tranche de tissu. À chaque extrémité de la zone infectée, une zone de péri-infarctus (PIZ 1 et 2) a été analysée en plus de la zone située entre l'infarctus et la surface épicardique du myocarde ventriculaire (PIZ-EPI). Une section transversale du cœur montrant les zones mentionnées ci-dessus est présentée dans notre récente publication (11).

Aucun infarctus n'a été infligé à de faux animaux (SWO et SWW) ou aux contrôles de consommation d'eau (CONT); par conséquent, il n'a pas été possible d'établir / d'analyser des zones de péri-infarctus et d'infarctus. Seules les zones sous-épicardiques et non infarcies ont été évaluées chez ces animaux et comparées à des zones équivalentes d'animaux infectés.

Quatre champs voisins ne se chevauchant pas ont été capturés à un grossissement de 40 × pour chacune des zones énumérées. Pour chaque champ, trois photographies ont été prises en utilisant trois filtres différents: rouge (Alexa Fluor 594), vert (Alexa Fluor 488) et bleu (DAPI). Cela nous a permis de co-localiser MPO et CD68 avec DAPI sur chaque champ. Les microphotographies ont ensuite été analysées à l'aide du progiciel ImageJ (NIH, Bethesda, MD). La quantification du nombre total de cellules par champ visuel a été effectuée par deux chercheurs indépendants, en comptant le nombre total de cellules positives dans chaque champ à l'aide de l'outil "Multipoints".

2.7. Analyse statistique

La valeur médiane, les intervalles de confiance (IC) de la médiane et de l'intervalle interquartile (IQR) de la MPO et les cellules positives pour la coloration des anticorps anti-CD68 par champ de vision des zones équivalentes entre six groupes expérimentaux ont été comparés. . L'analyse statistique a été réalisée à l'aide du logiciel MedCalc (Ostende, Belgique). Pour la comparaison statistique entre les groupes, le test de Mann-Whitney pour échantillons indépendants a été utilisé. La signification statistique a été fixée à p <0,05.

Les différences en pourcentage ont été utilisées pour exprimer nos résultats et les comparer aux données de la littérature.

3. les résultats

3.1. Remarques générales

Les sections de chaque groupe expérimental ont été évaluées sur des sections colorées H & E. Dans les groupes MI, à l'intérieur de la face antérieure de la paroi ventriculaire gauche, des zones d'infarctus transmural ont été découvertes, caractérisées par l'absence totale de cellules sanguines ( Figures 1A, B). Une zone de tissu péri-infarctus a été caractérisée par une infiltration cellulaire dense et une hyperémie marquée (figure 1A). Les groupes non-MI n'ont montré aucune différence morphologique dans aucune partie de la paroi ventriculaire, y compris la zone de contrôle (CZ).
La co-localisation de la coloration DAPI avec les immunoréactivités MPO et CD68 a révélé ce qui suit: la MPO a été détectée principalement dans des granules cytoplasmiques de profils cellulaires ayant un diamètre compris entre 8 et 25 µm et contenant des noyaux segmentés (Figure 1D), le marquage CD68 à associer à la fois aux surfaces cellulaires et au cytoplasme de profils contenant principalement des noyaux non segmentés a été trouvé (figure 1F). En outre, presque aucune co-localisation de MPO et de CD68 n'a été enregistrée (figure 1C).
Un "anneau" constitué de quelques couches de profils cellulaires, immunoréactifs à la fois pour MPO et CD68, a été noté dans le myocarde sous-épicardique dans des coupes de tous les groupes expérimentaux (figure 1E), à l'exception des coupes de groupe de contrôle non MI.

3.2. Expression de MPO et CD68 dans les zones de contrôle et sous-épicardiques du myocarde

Lorsque les densités d'expression de MPO et de CD68 dans les zones de contrôle (CZ) ont été évaluées, il a été constaté que les densités étaient très faibles pour les deux marqueurs (Tableau 1), alors qu'il n'y avait pas de différence entre les groupes MI et non-MI. -MI pour CD68 (p = 0,56); L’expression MPO, bien que très faible, était significativement plus élevée dans les groupes IM (p
L'expression des deux marqueurs a également été comparée entre les groupes MI et non-MI dans les zones sous-épicardiques. Le groupe non IM pour cette comparaison n'incluait pas les témoins non opérés, car ils ne présentaient pas d'immunomarquage dans les zones sous-épicardiques (voir section 3.1). Dans ces zones, l'expression des deux marqueurs était significativement plus élevée dans les groupes IM, autour d'une augmentation de six (pour MPO) et de triple (pour CD68).

Lorsque les expressions MPO et CD68 ont été comparées dans les zones sous-épicardiques des deux groupes factices (SWO vs. SWW), une valeur significativement plus petite (p <0,001) expression trouvée dans SWW pour MPO. Aucune différence (p = 0,9560) dans l'expression sous-épicardique de CD68 a été trouvée lorsque ces deux groupes simulés ont été comparés.

3.3. Expression de MPO et CD68 dans les zones de péri-infarctus des groupes MI

Les valeurs médianes et les intervalles interquartiles (IQR) ont été obtenus pour les décomptes de profils cellulaires immunoréactifs identifiés MPO (Figure 2A, E, I) et CD68 (Figure 2B, F, J) dans des champs de vision prédéterminés. et les trois groupes expérimentaux MI – uniquement l'eau de boisson (WO), le vin blanc standard (WW) et le vin blanc riche en polyphénols (PW) – ont été comparés (tableau 1 et figure 2).

Aucune différence significative n'a été trouvée entre les groupes expérimentaux pour IZ et CZ. Lorsque l'on compare les expressions MPO et CD68 dans les ZIP de tous les groupes expérimentaux, il devient évident que, dans tous les cas, l'expression MPO était plus intense, en particulier dans les zones PIZ-EPI.

3.4. Expression de MPO: comparaisons au sein et entre les groupes MI

Le profil d'expression de la MPO variait de manière significative entre les diverses ZIP au sein des groupes expérimentaux individuels, la PIZ-EPI étant de plus en plus infiltrée et suivie par les PIZ 1 et 2 (voir tableau 1).

Lorsque les expressions de MPO dans une zone donnée ont été comparées entre groupes expérimentaux, plusieurs résultats importants ont été révélés: il n’existait pas de différence significative entre les groupes WW et PW (pour les ZI 1 et 2, p = 0,3808 et pour PIZ-EPI, p = 0,6761) et il y avait une atténuation significative de l'expression dans les deux groupes de buveurs de vin par rapport au groupe expérimental WO (p <0,001).

Dans notre récent article, nous avons inventé un terme / acronyme "atténuation liée au vin" (WRA) pour souligner notre principale découverte: l'atténuation de l'inflammation liée à une consommation modérée de vin blanc. Les valeurs de WRA dans les groupes WW et PW, pour différentes zones cibles et entre différents marqueurs, sont exprimées en pourcentages par rapport à l'expression dans le groupe WO.

Une WRA significative dans l'expression de MPO a été notée dans les PIZ 1 et 2: diminution de 37% pour WW et diminution de 42% pour PW – et PIZ-EPI – réduction de 49% pour WW et réduction de 46%. pour PW lorsqu'il est lié au groupe WO.

3.5. Expression de CD68: comparaisons au sein et entre les groupes MI

Lorsque les profils d'expression de CD 68 à l'intérieur et entre les groupes ont été analysés et comparés à l'expression de MPO, des tendances similaires ont été observées; dans ce groupe, seuls les groupes 1 et 2 du groupe WO étaient les zones les plus densément infiltrées, tandis que dans les groupes WW et PW, les modèles d’infiltration étaient comparables aux modèles MPO mais avec une différence majeure: la densité de l’infiltration de CD68. il était quatre fois plus petit que la densité de MPO. Contrairement à MPO, le groupe PW avait une expression de CD68 plus petite dans les deux zones étudiées, mais la différence n’atteignait pas la signification statistique (pour les ZIP 1 et 2, p = 0,0624 et pour la ZI-EPI, p = 0,1201). Il y avait une atténuation significative de l'expression dans les groupes de vin par rapport au groupe expérimental WO (p <0,001).

Une WRA significative dans l'expression de CD68 a été notée dans les deux zones étudiées:

ZI 1 et 2: réduction de 79% pour le groupe WW et de 86% pour le groupe PW par rapport au groupe WO

PIZ-EPI: diminution de 29% pour WW et de 51% pour PW par rapport à celle observée dans le groupe WO.

4. Discussion

Cette étude a examiné l’influence d’une consommation modérée de vin blanc sur les caractéristiques de l’infiltration inflammatoire du myocarde par deux sous-populations principales de leucocytes à la suite d’un IM expérimental. La ligature LAD permanente a été utilisée pour créer une zone d'infarctus bien définie, entourée d'une zone de péri-infarctus caractérisée par une hyperhémie massive et une extravasation cellulaire. Il est bien établi que la ligature permanente, contrairement à l'ischémie reperfusion, provoque non seulement une invasion importante, immédiate et clairement détectable de neutrophiles (15), mais également un afflux de neutrophiles orchestré et dépendant du temps suivi de macrophages (6). , tandis que le schéma de reperfusion de la lésion est caractérisé par un afflux simultané de neutrophiles et de macrophages (16). Nous avons tenté de distinguer deux populations de leucocytes en combinant des marqueurs couramment utilisés pour les neutrophiles et les monocytes / macrophages: MPO et CD68. Bien qu'il existe des preuves de non-exclusivité dans la distribution de ces deux antigènes myéloïdes sur différentes sous-populations de leucocytes (17,18), en ce qui concerne leur expression chez les rongeurs, il a été rapporté que MPO est exprimé dans les phases immature et mature. neutrophiles et les éosinophiles, alors que son expression dans les cellules de la lignée monocytaire est généralement faible (19). Le même groupe d'auteurs, basé sur leur propre expérience et sur celle d'autres personnes, a associé l'expression de CD68 aux lysosomes de la plupart des cellules de la lignée monocyte / macrophage (19). Notre découverte de la localisation extrêmement rare de ces deux marqueurs myéloïdes, ainsi que de leurs associations avec les profils cellulaires polymorphonucléaires (MPO) et mononucléaires (CD68), nous a permis de différencier les deux classes de leucocytes mentionnées. Bien qu'il existe une expression croisée des deux marqueurs, nous pensons que notre découverte (principale) concernant leur modèle densité / expression par rapport à différents modèles expérimentaux est plus importante que leur rôle spécifique. marqueurs myéloïdes, ce qui est particulièrement pertinent pour MPO. Un examen complet récent du rôle joué par l'OMP en tant que médiateur local des lésions tissulaires associées à l'inflammation a conclu que l'excès et la sous-expression de l'OMP étaient liés à une aggravation des résultats. de la maladie (20). En ce qui concerne les modèles d'infarctus du myocarde / d'ischémie myocardique, les rôles néfastes à large spectre de la MPO ont été confirmés à la fois aux stades initial et avancé de la progression de l'infarctus (21). Par conséquent, des modèles expérimentaux de déficit en MPO ont été créés chez la souris et liés à une dilatation du ventricule gauche nettement plus petite, conduisant à une amélioration de la fonction ventriculaire (17) et à une réduction du dépôt de collagène ainsi qu’à une moindre susceptibilité à la fibrillation auriculaire et à la fibrillation auriculaire. ventriculaire (7). Logiquement, la MPO a commencé à être perçue comme une cible thérapeutique importante dont l'activité a été atténuée avec succès par les nitroxydes (22) et le paracétamol (23) et, plus récemment, par l'inhibiteur. MPO hautement sélectif, PF-1355 (21).
Lorsque nous avons analysé l’expression de MPO dans les zones péri-infarctus et comparé nos trois modèles animaux MI, nous avons pu conclure que: il n’y avait pas de différence entre les groupes de buveurs de vin (WW vs . PW), quelles que soient les zones comparées, mais boire du vin semble atténuer l'expression du MPO par rapport aux animaux qui boivent de l'eau (WO). Cette atténuation liée à la consommation de vin (WRA) était très significative dans les deux zones évaluées et variait entre 37% et 49% de réduction de l'expression de la MPO par rapport à la même zone de péri-infarctus d'animaux buvant de l'eau. . Cette atténuation est comparable à une diminution de l'intensité de la coloration des neutrophiles observée entre une obstruction permanente du flux coronaire murin et des modèles d'ischémie-reperfusion dans lesquels une réduction de 44% a été observée chez les animaux présentant une reperfusion (24). Nous proposons donc que l'atténuation du MPO lié au vin soit comparable à celle de l'atténuation liée à la reperfusion.
La lésion de reperfusion présente plusieurs avantages à long terme (comparés à une ischémie permanente) qui sont peut-être déclenchés par l'atténuation des neutrophiles: détérioration moins importante de la fonction cardiaque, dynamique limitée des taux de cytokines et diminution du dépôt de collagène total (15). À ce stade, nous ne pouvions pas être sûrs qu'ils figureraient dans notre modèle de préconditionnement du vin. Nous prévoyons d'étendre la durée de survie après l'infarctus dans nos expériences futures et d'évaluer plus avant notre modèle en ce qui concerne les avantages de la reperfusion.
Lorsque des anti-inflammatoires (paracétamol et conjugué dans le temps) étaient utilisés comme inhibiteurs de l'activité de la MPO sur les tissus cardiaques ventriculaires isolés 24 heures après la ligature coronaire permanente, une réduction d'environ 60% était observée. Activité du MPO (25). Une telle forte inhibition pourrait résulter de la nature de cette expérience: les leucocytes producteurs de MPO dans les homogénats de tissus ont été directement exposés aux inhibiteurs ci-dessus. Une inhibition plus forte de la MPO dans les extraits tissulaires qu'in vivo a également été observée pour un nouvel inhibiteur spécifique de la MPO appelé PF-1355, alors que plus de 80% de son activité était le contrôle de la MPO était réduit dans les extraits tissulaires; la réduction tissulaire était d'environ 60% (21). Cet inhibiteur a été utilisé après conditionnement et la période d'incubation post-infarctus a duré une semaine. Les résultats de cette étude ne peuvent donc pas être comparés directement avec notre projet de préconditionnement, mais même si notre WRA est de moitié. du même résultat obtenu avec des inhibiteurs spécifiques, est encore assez significatif. Il reste à déterminer quelle est l’inhibition optimale des neutrophiles / MPO. Parmi les nombreuses fonctions importantes pour la réparation post-IM, les neutrophiles semblent être cruciaux pour polariser les macrophages vers un phénotype réparateur et leur déplétion chez la souris influence le remodelage cardiaque avec une fibrose accrue et le développement d'une insuffisance cardiaque (4), interférant ainsi en cas d’inflammation aiguë guidée par les neutrophiles doit être réglé avec soin; cela vaut la peine de penser au dilemme "combien est-ce trop cher?"
L'expression de CD68, que nous avons utilisée comme marqueur pour les cellules mononucléées de la lignée monocyte / macrophage, a montré un motif WRA similaire à MPO, mais il y avait plusieurs différences importantes: expressions globales plus petite dans toutes les zones / modèles d'animaux (voir tableau 1); WRA significatif et plus fort (comparé au MPO) dans les deux zones de péri-infarctus; et une atténuation plus forte plus forte chez les PW que chez les groupes d’animaux WW, bien qu’elle n’ait pas atteint le niveau de signification. L’expression la plus faible de CD68 est probablement due à un retard dans l’infiltration des monocytes / macrophages des zones péri-infarctus par rapport aux neutrophiles, qui sont à ce stade à leur apex, tandis que les monocytes / macrophages inflammatoires atteignent la leur apogée le troisième jour post-IM (26,27).
Avec les animaux PW, nous voulions examiner comment des modifications de la teneur totale en phénoliques pourraient atténuer davantage l’activité des neutrophiles et des macrophages et la cinétique de mobilisation. De nombreuses études portant sur la protection du myocarde / la récupération post-IM ont principalement porté sur l’effet du vin rouge en raison de son contenu polyphonique élevé, principal antioxydant du vin (28). Une grande différence dans la concentration de composés phénoliques sélectionnés (acide gallique, catéchine, épicatéchine, procyanindine B1 et resvératrol total) dans les vins standard et les vins riches en polyphénols est présentée dans notre récente publication (13), démontrant qu'une macération prolongée du vin le blanc provoque un contenu phénolique total très similaire à celui du vin rouge. En outre, les preuves à l'appui des bienfaits du vin blanc sur la santé, bien que limitées, augmentent. Les vins blancs contiennent des composants tels que les acides hydroxycinnamiques (acide caféique) et les monophénols (tyrosol), connus pour leurs propriétés antioxydantes et leurs effets cardiovasculaires positifs (29.30). Nei nostri esperimenti, per quanto riguarda MPO, non è stata trovata alcuna differenza tra le attenuazioni WW e PW e, per CD68, la differenza esisteva con un WRA più forte nei modelli PW ma non ha raggiunto un significato statistico, suggerendo che un consumo moderato di vino ricco di polifenoli ha un effetto più forte sui macrofagi che sui neutrofili entro le prime 24 ore.

Per quanto ne sappiamo, questa è la prima volta che viene descritto un "anello infiammatorio" subepicardico, costituito da diversi strati di profili cellulari immunoreattivi per MPO e CD68, notati per la prima volta negli animali falsi. Particolarmente interessante è stato il ritrovamento esattamente dello stesso numero mediano di profili MPO e CD68, per campo determinato, senza che i marcatori fossero co-localizzati. Nessun MPO e solo il profilo occasionale positivo CD68 è stato trovato negli animali di controllo, suggerendo che questo risultato è correlato all&#39;intervento chirurgico. Per avvicinarsi all&#39;arteria LAD per infliggere l&#39;MI (o eseguire l&#39;operazione simulata), l&#39;integrità del sacco pericardico doveva essere interrotta, il che significa che, dopo l&#39;intervento, la superficie epicardica del cuore pulsante stava sfregando contro i tessuti / organi che la circondavano e che ciò deve aver causato una lieve reazione infiammatoria. Quando le zone equivalenti in gruppi di animali con IM sono state confrontate con quelle di animali simulati, sono stati trovati circa 6- e 3 volte mediane più piccole negli animali simulati, suggerendo che l&#39;IM è sicuramente uno stimolo molto più forte per la reazione infiammatoria rispetto all&#39;attrito pericardico. Volevamo vedere se WRA per MPO e CD68 potesse essere osservato negli animali falsi; quindi, il gruppo di animali finti che beveva vino fu introdotto e confrontato con animali finti che bevevano acqua. Inoltre, per MPO, WRA era più forte che nei gruppi MI (riduzione del 65% dell&#39;espressione), mentre per CD68 non è stata osservata alcuna WRA.

Concludiamo che ci sono diverse differenze nell&#39;espressione dell&#39;infiltrazione infiammatoria nelle zone peri-infarto peri-infarto (animali MI) e "sfregamento" (animali non-MI); c&#39;era un&#39;espressione di CD68 più piccola, suggerendo un ritardo nella migrazione di monociti / macrofagi e c&#39;era un significativo WRA per entrambi i marcatori, mentre nella zona subepicardica degli animali falsi, l&#39;infiltrazione di neutrofili e monociti / macrofagi era simultanea e il vino non causava attenuazione di mononucleari. Negli animali con IM, l&#39;effetto dello sfregamento è stato aggiunto allo stimolo infiammatorio dell&#39;infarto, risultando in un&#39;espressione significativamente più alta di MPO in PIZ-EPI rispetto a PIZ 1 e 2. Per CD68 negli animali con IM, questo doppio stimolo ha causato l&#39;arrossamento di WRA, che può essere facilmente osservato se si confrontano le sue espressioni in PIZ 1 e 2 e PIZ-EPI. L&#39;MI modifica la tensione della parete ventricolare, che si traduce sicuramente nelle zone peri-infartuali causando nuovi e diversi sforzi meccanici, che sembrano avere un effetto sulla proliferazione e differenziazione dei macrofagi (31,32). Sembra che l&#39;effetto stimolante del cambiamento / aumento dello stiramento verso i macrofagi situati nelle zone subepicardiche di animali MI e non MI neutralizzi l&#39;effetto di attenuazione del vino.

Nel complesso, il nostro studio rivela che anche un breve consumo moderato di vino bianco, indipendentemente dal suo contenuto di polifenoli, può essere collegato a un auspicabile effetto antinfiammatorio. Ciò si ottiene attenuando l&#39;invasione dei leucociti della zona per-infarto del miocardio che è simile al livello di attenuazione correlata alla riperfusione. Possiamo aspettarci che questo effetto modulatorio positivo iniziale si traduca in altre fasi della guarigione dell&#39;infarto, inclusa una transizione dalle fasi infiammatorie a quelle proliferative.